在以前,濾光片主要應(yīng)用在顯微鏡的領(lǐng)域,隨著國(guó)內(nèi)高質(zhì)量制造業(yè)的飛速發(fā)展,現(xiàn)在濾光片的應(yīng)用已經(jīng)越來(lái)越廣泛了,隨之變化的便是從業(yè)隊(duì)伍也在擴(kuò)大,瑞誠(chéng)光電熱列歡迎各位愿意從事光學(xué)行業(yè)的朋友加入到我們的隊(duì)伍來(lái),待遇從優(yōu)。
濾光片根據(jù)使用目的的不同,可分為 TIRF 濾光片、干涉濾光片、全內(nèi)反射濾光片、Raman濾光片、拉曼濾光片、FISH 熒光濾光片和應(yīng)原位雜交濾光片。
根據(jù)本身功能的不同,其可分為激發(fā)濾光片、發(fā)射濾光片、二向色鏡/二向色濾光片/二色鏡、陷波濾光片、燃料濾光片、熒光素濾光片、ND 濾光片、中性濾光片、中性灰度鏡、截止濾光片、高通濾光片、低通濾光片、帶通濾光片、紫外濾光片和 UV 濾光片。
根據(jù)主要應(yīng)用領(lǐng)域,濾光片又可分為生物濾光片、醫(yī)學(xué)濾光片和天文學(xué)濾光片。瑞誠(chéng)光電可提供各種類型的濾光片,詳情請(qǐng)聯(lián)系瑞誠(chéng)光電客服服務(wù)人員。
主要用于生命科學(xué)和生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域,作用是在生物醫(yī)學(xué)熒光檢驗(yàn)分析系統(tǒng)中分離和選擇物質(zhì)的激發(fā)光與發(fā)射熒光的特征波段光譜。
中性灰度鏡(neutral density filter)又叫中灰密度鏡,其作用是均勻地過(guò)濾光線。這種濾光作用是非選擇性的,也就是說(shuō),ND 鏡對(duì)各種不同波長(zhǎng)的光線的減少能力是同等的、均勻的,而對(duì)原物體的顏色不會(huì)產(chǎn)生任何影響,可以真實(shí)再現(xiàn)景物的反差。
熒光原位雜交技術(shù)(Fluorescence in situ hybridization, FISH)是根據(jù)已知微生物不同分類級(jí)別上種群特異的 DNA 序列,以利用熒光標(biāo)記的特異寡聚核苷酸片段作為探針,與環(huán)境基因組中 DNA 分子雜交,檢測(cè)該特異微生物種群的存在與豐度。
陷波濾光片通常用于拉曼光譜測(cè)試。通常也被稱作帶阻或者帶抑制濾光片。它可以透過(guò)絕大多數(shù)波長(zhǎng),但是將特定波長(zhǎng)范圍內(nèi)(阻帶)的光衰減到非常低的水平。
用于全內(nèi)反射熒光法顯微鏡,利用全內(nèi)反射產(chǎn)生的隱失波照明樣品, 使照明區(qū)域限定在樣品表面的一薄層范圍內(nèi),從而觀測(cè)到非常不易察覺(jué)的現(xiàn)象。
和燃料的激發(fā)峰、發(fā)射峰匹配,且交疊小
截止深度深
自發(fā)熒光小
透鏡面形好,利于熒光成像的提取。如果透鏡表面的平整度不好,則會(huì)產(chǎn)生波前扭矩或楔角,波前扭矩會(huì)改變聚焦或成像位置,一般透射波前扭矩(TWD)比反射波前扭矩
(RWD)對(duì)成像的影響更加直接,也會(huì)有更嚴(yán)格的要求。
熒光濾光片一般采用單片無(wú)色透明的玻璃作為基底,在玻璃的兩個(gè)表面鍍膜。增反膜的厚度會(huì)選擇為半波長(zhǎng)的整數(shù)倍,此時(shí)反射疊加增強(qiáng);增透膜的厚度為 1/4 波長(zhǎng)的倍數(shù),此時(shí)投射疊加增強(qiáng)。
熒光濾光片的激發(fā)和成像方式大體可分為如下三種:聚焦型:入射激發(fā)光聚焦在待測(cè)樣品上;
寬場(chǎng)型:入射激發(fā)光束以較大的面積打到樣品上
全內(nèi)反射型(TIRF):激發(fā)光透過(guò)樣品,觀測(cè)倏逝波成像
濾光片在實(shí)際中一般都是以濾光片組的形式來(lái)使用的。熒光濾光片組一般由三個(gè)透鏡組成:激發(fā)濾光片(EX)、二向色鏡和發(fā)射濾光片(EM),他們都至于濾光片盒中(Cube),具體結(jié)構(gòu)如下圖所示,
激光濾光片的作用是使激發(fā)光能夠有效的通過(guò),而避免外界熒光波段的光線進(jìn)入濾光片盒,二向色鏡的作用主要是分光,反射激光使其照射樣品,同時(shí)又能夠讓樣品產(chǎn)生的熒光通過(guò),達(dá)到發(fā)射濾光片,發(fā)射濾光片的作用是進(jìn)一步濾掉激發(fā)光和其它雜散光,使系統(tǒng)得到比較純粹的熒光信號(hào)。
如何選擇合適的濾光片是廣大科研人員在項(xiàng)目過(guò)程中需要考慮的問(wèn)題。瑞誠(chéng)光電快速準(zhǔn)確地為您提供選型支持,請(qǐng)聯(lián)系瑞誠(chéng)光電技術(shù)人員。
熒光濾波片選取的原則是在成像端盡可能讓熒光/發(fā)射光透過(guò),同時(shí)完全阻擋激發(fā)光,獲得最高的信噪比。尤其是對(duì)于多光子激發(fā)和全內(nèi)反射顯微鏡的應(yīng)用,微弱的噪聲也會(huì)對(duì)成像效果造成很大的干擾,因此對(duì)信噪比的要求更高。
通常我們看濾光片的參數(shù)一般會(huì)看透射率光譜,但往往熒光相對(duì)于激發(fā)光的強(qiáng)度很弱,選擇濾光片更需要參考阻擋深度光譜圖——OD 值。OD 值更能直觀地反映濾光片對(duì)光的阻擋特性。
在選擇激發(fā)濾光片和發(fā)射濾光片時(shí),兩者的阻擋深度光譜交點(diǎn)(OD 交點(diǎn))是重要的判斷標(biāo)準(zhǔn),一般要求寬場(chǎng)光源激發(fā)是交點(diǎn) OD 值大于 5,激光激發(fā)時(shí)大于 OD6,以實(shí)現(xiàn)較好的熒光信噪比。
有時(shí)激發(fā)和發(fā)射濾光片(EX 和 EM 濾光片)的透射光譜組合看起來(lái)很完美,但轉(zhuǎn)換成
OD 值之后卻發(fā)現(xiàn)光譜交點(diǎn)僅為 OD1,不符合熒光成像的基本要求。因此,一般會(huì)建議激發(fā)和發(fā)射濾光片的透射光譜有一定的距離,比如 10nm。
了解濾光片的明敏規(guī)格能夠使用戶快速讀懂各個(gè)濾光片廠家的產(chǎn)品,例如Olympus,Leica,
Nikon, Zeiss, Sunny 和 Motic。
激發(fā)濾光片(ET480/40x)—ET 表示濾光片的系列,480 為中心波長(zhǎng),40 為帶寬(-/+20),x表示激發(fā)片。
二向色鏡(T495lpxr)—T 表示二向色鏡的系列,495 表示 50% cut-on 對(duì)應(yīng)的波長(zhǎng)。
發(fā)射濾光片(ET535/50m)—ET 表示濾光片的系列,535 為中心波長(zhǎng),50 為帶寬(-/+25),
m 表示發(fā)射片。
T—磁控濺射鍍膜二向色鏡,非激光應(yīng)用,通常 45 度角入射。
ET—磁控濺射鍍膜激發(fā)片或發(fā)射片,通常 0 度角入射。
ZT—磁控濺射鍍膜二向色鏡,激光應(yīng)用,通常 45 度角入射。 ZET—磁控濺射鍍膜激發(fā)片,激光應(yīng)用,通常 0 度角入射。
lp/sp/bp—長(zhǎng)通/短通/帶通。
NF—陷波濾光片 notch filter 縮寫。
DC—dichroic 縮寫。
pc—polychroic 縮寫,表示多波段的二向色鏡。 xr/xt—extended reflection/extended transmission 縮寫。 xru—extended reflection including UV 縮寫。
TRF—表示 TIRF。
RET—拉曼專用激發(fā)片或發(fā)射片。
RT—拉曼專用二向色鏡。
在標(biāo)準(zhǔn)濾光片不滿足使用要求時(shí),需要定制濾光片/濾波片,瑞誠(chéng)光電為您提供各種濾光片的定制服務(wù)。
首先,需要考慮入射角 AOI 和圓錐角 Cone Angle 這兩個(gè)量,入射角是光線入射的角度,比如二向色鏡一般為 45°,圓錐角是由于聚焦或發(fā)散,邊緣光線和中心光線的夾角,有時(shí)也用半錐角來(lái)表示。
入射角和圓錐角的改變對(duì)濾光片的光譜曲線有非常大的影響,入射角增大可能會(huì)使濾光片曲線藍(lán)移,而圓錐角可能會(huì)使二向色鏡的透過(guò)區(qū)減小。
其次,需要考慮光的偏振,根據(jù)菲涅爾偏振公式,光在兩種物質(zhì)界面?zhèn)鞑r(shí),反射率和透射率和光的偏振狀態(tài)有關(guān),因此用戶在定制時(shí)必須制定光的偏振,以保證最后濾光片達(dá)到要求。
熒光濾光片光源
LM-75 金鹵燈——仿汞燈光譜。
使用壽命達(dá)到 1500 小時(shí);具有標(biāo)準(zhǔn)的汞燈光譜峰值;
提供 340~800nm 波段的光譜;輸出穩(wěn)定;
操作簡(jiǎn)單、性價(jià)比高;
能夠和目前市場(chǎng)主流的顯微鏡接口直接匹配,無(wú)需校正。
太陽(yáng)光模擬濾光片:
我公司獨(dú)家生產(chǎn)AM1.5太陽(yáng)光模擬濾光片,產(chǎn)品等級(jí)AAA+,技術(shù)獨(dú)特,效果非常好。AM是air mass的縮寫,也就是大氣質(zhì)量的意思。因?yàn)樘?yáng)入射到地球不同維度的天頂角不同,天頂角是入射光線與地面法線的夾角,也即光程不同,因此相對(duì)的等效大氣質(zhì)量也不同。用公式AM≈1/cos(z),z為天頂角可知,AM1.5對(duì)于與天頂角48.2°,包括中國(guó),歐洲,美國(guó)在內(nèi)的大部分國(guó)家都處在這個(gè)中緯度區(qū)域。因此一般地表上的太陽(yáng)光譜用都用AM1.5表示,能量取1000W/m2。