常用熒光光源介紹
2019-12-24 12:17:56
熒光光源主要應用在熒光顯微鏡中，是細胞生物學的基本工具，它是由光源、濾光片、透鏡等光學系統(tǒng)等主要部件組成，是利用一定波長的光激發(fā)標本發(fā)射熒光，通過物鏡和目鏡系統(tǒng)放大觀察標本的熒光圖像而實現(xiàn)對熒光樣品的定性定量研究。
激發(fā)、濾光、成像、淬滅。熒光實驗的調(diào)整本質上就是協(xié)調(diào)好以上四個因素得到最好的效果，一個常被忽視的方面是光源的使用，熒光顯微鏡的常用光源主要有白光光源、高壓汞燈、氙燈、金屬鹵素燈、LED，以及最新的二極管激光光源。
1、汞燈
超高壓汞燈(50≤200 W)由石英玻璃制成，中間呈球形，并含有一定量的汞，它在兩個電極之間排出，導致汞蒸發(fā)，球體內(nèi)的壓力迅速增加，當汞完全蒸發(fā)時，可達到50×70標準大氣壓。這一過程一般需要5分鐘左右，超高壓汞燈的發(fā)光是電極間放電引起汞分子解離和還原過程中光子發(fā)射的結果，它散發(fā)出強烈的紫外線和藍紫光，足以刺激各種熒光物質，因此在熒光顯微鏡中得到了廣泛的應用。
2、氙燈
氙燈和汞燈作為白光光源，可以提供從紫外到近紅外的一系列波長，但它們有不同的激發(fā)光譜，水銀燈聚焦于近紫外、藍光和綠光，能產(chǎn)生高激發(fā)能峰值的明亮熒光信號，但具有較強的光毒性，因此，高壓氧用于固定樣品或弱熒光成像，相比之下，氙光源的激發(fā)相對平緩，可以用來比較不同波長之間的強度，比如測量鈣離子濃度。氙燈的強激發(fā)為800~1000 nm近紅外。
XBO較HBO的特點：
1）光譜強度更均勻
2）在紅外及中紅外仍有較強光譜強度
3）能量較強更易到達物鏡后孔徑
推薦產(chǎn)品：xbo75w，100W氙氣燈，一般使用壽命：400H，1200h。
3、金屬鹵素燈
這是近年來出現(xiàn)的一種光源。它與汞燈的激發(fā)光譜非常相似，但通過光纖連接到顯微鏡上，可以散熱，壽命更長，將光纖從光源連接到顯微鏡可以大大減少光產(chǎn)生的熱量，用于活細胞成像的金屬鹵化物燈的另一個優(yōu)點是內(nèi)置的強度設計裝置，它可以很容易地調(diào)節(jié)受激光。
推薦產(chǎn)品：XPO金屬鹵素燈光源，功率在120W左右，適用于各大廠家的高端熒光顯微鏡，使用壽命2500小時以上。
4、LED。光源開關以毫秒為單位，縮短了樣品在光下的曝光時間，延長了壽命。此外，LED光的衰減是快速和準確的，這可以大大降低光毒性在長期活細胞測試，與白光相比，LED只能在較窄的光譜范圍內(nèi)激發(fā)，多個LED波段使LED光源能夠提供多色熒光的應用。
推薦產(chǎn)品：蔡司科利布里，使用壽命幾千小時。
5、激光光源。它是一種利用二極管發(fā)射單波長激光的光源，該光源的好處是激發(fā)光波長超窄，成像不容易產(chǎn)生噪點，局限就是各染料廠家提供的熒光染料的激發(fā)波長會有差異，如果用單波長的激光激發(fā)，有時候會導致激發(fā)能量不足的情況。
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